使用前仔細閱讀本說明書。本酶聯mianyi試劑盒是基于雙抗體夾心技術原理,來檢測大鼠Wnt2B,只能用于研究用途,不得用于醫(yī)學診斷。
用 途:用于大鼠血清、血漿及相關液體樣本中Wnt2B測定。
工作原理
本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯mianyi吸附法(ELISA)測定樣品中大鼠Wnt2B水平。向預先包被了大鼠Wnt2B單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠Wnt2B,溫育;溫育后,加入生物素標記的抗Wnt2B抗體。再與鏈霉親和素-HRP結合,形成mianyi復合物,再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶,然后加入底物A、B,產生藍色,并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顏色的深淺與樣品中大鼠Wnt2B的濃度呈正相關。
試劑盒組成
試劑盒組成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
說明書 | 1份 | 1份 | |
封板膜 | 2片(48) | 2片(96) | |
密封袋 | 1個 | 1個 | |
酶標包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
標準品160ng/L | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品稀釋液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
鏈霉親和素-HRP | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
生物素標記的抗WNT2B抗體 | 0.5ml×1瓶 | 1 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
終止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
濃縮洗滌液 | (20ml×20倍)×1瓶 | (20ml×30倍)×1瓶 | 2-8℃保存 |
需要而未提供的試劑和器材
注意事項
洗板方法
手工洗板方法:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據需要,重復此過程數次。
自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中
標本要求
1.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
2.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
操作程序
80ng/L | 5號標準品 | 120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液 |
40ng/L | 4號標準品 | 120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液 |
20 ng/L | 3號標準品 | 120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液 |
10ng/L | 2號標準品 | 120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液 |
5 ng/L | 1號標準品 | 120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液 |
2.根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
3.加樣:1)空白孔,空白對照孔不加樣品,生物素標記的抗WNT2B抗體,鏈霉親和素-HRP,只加顯色劑A&B和終止液,其余各步操作相同;2)標準品孔:加入標準品50ul,鏈霉親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體,故不加);3)代測樣品孔:加入樣本40ul,然后各加入抗WNT2B抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul,蓋上封板膜,輕輕震蕩混勻,37℃溫育60分鐘。
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6.顯色:每孔先加入顯色劑A50ul,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
7.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
8.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后10分鐘以內進行。
9.根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。
操作程序總結:
試劑盒性能:
1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.92以上。
2.批內與批間應分別小于9%和15%
檢測范圍:
檢測范圍:2ng/L -90ng/L
保存條件及有效期:
保存:2-8℃。
有效期:6個月(2-8℃)。